EvaGreen Dye & Master Mixes for qPCR

新一代DNA結合染料

EvaGreen^TM是新一代的綠色熒光核酸染料。它的諸多特點使它可以用于多種應用，包括：qPCR，高分辨率DNA熔解曲線（HRM）分析，常規的DNA定量以及毛細管電泳。Biotium的研發團隊綜合染料的穩定性、安全性、光譜特性等開發出優于SYBR? Green I和其它商品化qPCR或者HRM染料的EvaGreen^TM。

另外， EvaGreen? 染料是無毒、不致突變并且對水生生物沒有危險性的！

                                            圖 1. EvaGreen? 染料按需求釋放機制結合dsDNA。

                      EvaGreen? 染料是無毒、不致突變并且對水生生物沒有危險性的。

特點：

• 安全環保
  無毒性，不致突變并且對水生生物安全，操作安全并且易于清理

• 極高的靈敏度 
  

      在推薦濃度下使用時可以獲得最強的PCR擴增信號

• PCR抑制性極小
  智能化的“按要求釋放”DNA結合技術使得其抑制性遠小于SYBR? Green I

• 非常適合HRM分析
  

      無“染料重分布”缺陷，兼容PCR后的高分辨率熔解曲線分析

• 優越的兼容性
  和SYBR? Green I光譜相似，和各知名品牌的qPCR儀器兼容。替代SYBR? Green I，毋須改變任何目前使用的操作步驟和儀器設備

• 超強的穩定性
  

      在大部分生化條件下非常穩定，可在室溫下儲存并可反復凍融

• 兼容多重PCR
  在推薦濃度下使用時，無擴增子之間的染料遷移現象

• Fast EvaGreen? qPCR Master Mixes 
  Biotium的Cheetah? Taq化學修飾熱啟動酶

PCR 活性：

PCR 過程中當形成染料-DNA復合物時將會釋放熒光。和DNA的相互作用不可避免的對PCR造成干擾。這種干擾在初期尤為嚴重，因為這時染料-DNA結合比例最高。另一方面，足夠的染料濃度對于產生強的信號是非常關鍵的。因此合適的染料濃度對于獲得可靠的PCR性能是非常重要的。

對于目前使用的很多DNA結合PCR染料，如SYBR? Green I，最佳的染料濃度非常低，這將會影響熒光信號的釋放并且不適合分析HRM。 另外，低濃度的 SYBR? Green master mix 將會檢測不到在熔解峰時由于染料遷移造成的多重擴增子。將會產生不同的結果。

Figure 2. Comparison between Fast EvaGreen? master mix (green) from Biotium and two fast SYBR? Green master mixes from two leading companies, company A (blue) and company Q (red) showing superior sensitivity of EvaGreen? dye compared to SYBR? Green. A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.

EvaGreen? DNA-結合染料通過“按需求釋放”機制結合DNA（圖1）。染料由兩個DNA-結合染料單體構成并由柔性間隔基連接。沒有DNA存在時，染料二聚體成環狀沒有活性。當有DNA時，二聚體迅速分開并具有結合DNA的活性結合后并釋放熒光。這種化學平衡態提供了一種特殊的機制隨著PCR的擴增能夠源源不斷地供給具有活性的染料。因此，EvaGreen? master mix 能夠形成相對較高的染料濃度使熒光信號最大化并且避免了PCR干擾，特別適合qPCR和HRM的分析應用（圖2）。

安全性:

EvaGreenTM由于降低了細胞膜透性，因而比SYBRTM Green I更加安全。獨立實驗室的測試結果顯示，EvaGreen^TM既沒有誘變性也沒有細胞毒性。相反，雖然SYBR^TM Green I本身誘變性很弱，但由于它在可能細胞中抑制了正常DNA的修復機制，使其有誘變增強作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應該被足夠重視。

穩定性:

EvaGreenTM的穩定性極強。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。與之相反，SYBR^TM Green I不穩定而且降解后對PCR抑制性更強。

光譜兼容性:

EvaGreen? 染料具有和 FAM 或 SYBR? Green I相似的光譜，毋須改變條件即可替換。

其它應用:

EvaGreen? 染料是目前唯一的一種可以用于ddPCR的qPCR染料。

EvaGreen? 染料被廣泛應用于各種領域，例如 Fluidigm? 微流體 PCR 系統,，恒溫擴增反應，毛細管凝膠電泳，DNA定量和細胞活性檢測。Biotium 提供 EvaGreen? stand-alone dye, EvaGreen? qPCR master mixes和其它相關試劑和試劑盒。

Fast EvaGreen? and Probe Master Mixes:

Biotium offers EvaGreen? Master Mixes for qPCR and melt-curve analysis. Fast EvaGreen? Master Mix is our original formulation, suitable for most qPCR applications. Fast Plus EvaGreen? Master Mix is a newer formulation designed to minimize mis-priming and to be more tolerant of PCR inhibitors. Biotium’s probe master mixes do not contain DNA-binding dye, and are designed for use with oligo-based probes such as TaqMan? or MGB probes. Biotium’s master mixes feature Cheetah? Taq, our proprietary chemically-modified hot-start DNA polymerase. Unlike AmpliTaq Gold?, which takes 10 minutes or longer to activate, Cheetah? Taq is fully recovered in 2 minutes with high activity, making it particularly suitable for fast PCR. Mixes are available with or without ROX reference dye, and in low cost trial sizes.